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心肌缺血再灌注損傷與心肌細(xì)胞

更新時(shí)間:2023-02-10 15:42:46      點(diǎn)擊次數(shù):1937

研究背景

急性心肌梗死(Acute myocardial infarction , AMI)在發(fā)病率、死亡率、醫(yī)療費(fèi)用方面是一個(gè)日益嚴(yán)重的問(wèn)題。目前治療上的進(jìn)步,AMI死亡率已降低一半,但臨床之外的死亡率仍然較高。各種AMI動(dòng)物模型有助于我們對(duì)AMI的理解。

小鼠,兔子,狗,靈長(zhǎng)類和其他動(dòng)物已用于AMI模型的制備,但在實(shí)驗(yàn)室大鼠主要用于制備AMI模型,如SD大鼠、Wistar大鼠等。目前最常用的方法是左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)left coronary artery , LCA),一種是永久性結(jié)扎LCA,另一種是LCA缺血后再灌注。LCA缺血后再灌注短暫的阻塞通常是30min, 長(zhǎng)時(shí)間的阻塞是60-90min,造成更大面積的梗死,更高的死亡率。兩種模型方法在麻醉、手術(shù)過(guò)程、處理和組織學(xué)方面都需要類似的技術(shù)。短暫的阻塞能檢查治療方法和結(jié)局;完全的阻塞,在AMI延遲發(fā)作時(shí),有助于我們了解心肌重構(gòu),心血管結(jié)局,這時(shí)心肌挽救的可能性是有限的。永久結(jié)扎LCA術(shù)后的死亡率為10-50%,LCA缺血后再灌注損傷的死亡率要低得多。

永久性結(jié)扎LCA 24h后的心肌病理變化包括水腫和稀疏的心肌細(xì)胞浸潤(rùn)明顯,心肌纖維變的更薄,間隔更大。LCA缺血30min后再灌注24h的心肌病理變化包括出血區(qū),主要的多形核細(xì)胞浸潤(rùn),較少水腫,心肌纖維變薄,細(xì)胞浸潤(rùn)增多。AMI引起的生化變化有ROSRNS參與再灌注心臟的缺血后功能障礙,MDA聚集等。

研究模型

我們掌握了大鼠和小鼠急性心肌梗死模型的制備方法,以SD大鼠為例:麻醉大鼠,連上呼吸機(jī),在第5肋間間隙,用一個(gè)蚊式止血鉗打開(kāi)胸膜和心包,用夾子略微打開(kāi),縫合和結(jié)扎在距LCA起點(diǎn)約2-3 mm的位置。左心室前壁變得蒼白,結(jié)扎被認(rèn)為是成功的。結(jié)扎后,立即手動(dòng)排空空氣,關(guān)閉肌肉和胸腔皮膚。

 

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我們掌握了大鼠和小鼠心肌細(xì)胞的原代分離方法,以SD大鼠為例:出生24h內(nèi)的乳鼠,75%乙醇消毒皮膚,取出心臟,剪去心房和血管,剪碎心室,用0.014%膠原酶0.05%胰酶消化6-7次,保留上清,直至組織塊消化完畢,離心,沉淀用10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基重懸。放培養(yǎng)箱80min待心肌成纖維細(xì)胞貼壁后輕輕吹打培養(yǎng)基,收集上清,離心,加含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),即為心肌細(xì)胞。

 

心肌細(xì)胞.jpg

 

研究案例

目的:研究異槲皮素對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌梗死的保護(hù)機(jī)制和作用

結(jié)論:異槲皮素通過(guò)抗炎和抗凋亡因子以及調(diào)節(jié)TLR4 - NF -κB信號(hào)通路來(lái)改善急性心肌梗死。

路線

1. 異槲皮素改善急性心肌梗死大鼠心肌梗死面積通過(guò)抑制炎癥、氧化應(yīng)激和心臟細(xì)胞凋亡。

2. 異槲皮素增加急性心肌梗死大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合酶,降低誘導(dǎo)型一氧化氮合酶水平,抑制toll樣受體4核因子TLR4 – NF- κB信號(hào)通路。

核心文獻(xiàn)

1.Rat models of myocardial infarction. Thromb Haemost. 2006;96(5)

2.Isoquercetin ameliorates myocardial infarction through anti-inflammation and anti-apoptosis factor and regulating 

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