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Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的小鼠類風濕關(guān)節(jié)炎模型

更新時間:2022-12-20 15:06:41      點擊次數(shù):2149

動物雄性DBA1/J 小鼠 (6–8 )

型膠原:

型膠原(type collagen, C)以凍干粉形式購買,將其溶解在乙酸(10mM)中,通過溫和攪拌數(shù)小時至過夜獲得所需濃度(2-4 mg /ml)。當膠原蛋白溶解后,將其分為等份,冷凍-70。試劑和玻璃器皿應(yīng)預(yù)先4冷卻避免使C變性,注意攪拌板處于開啟狀態(tài),在寒冷的房間里也不會產(chǎn)生熱量。

乳化液的制備:

1.計算制備乳化液所需的膠原蛋白和完全弗氏佐劑(Complete Freund adjuvant, CFA)的體積,比例為1:1,每只小鼠需要50μl乳化液。

注意事項:使用組織勻漿器進行乳化,乳化過程中,盡可能將所有試劑放在冰上。保持試劑低溫可防止C變性,這對于在小鼠模型中誘發(fā)高發(fā)病率至關(guān)重要。

2. 將膠原蛋白一滴一滴地添加到CFA中,同時以中速混合乳化液,保持在低溫下操作。

3. 從勻漿器中取出乳化液,確保乳化液完全混合,外觀和粘度與攪打奶油相同。如果乳化程度不令人滿意,則進一步用勻漿器混合以提高乳化液質(zhì)量。

4. 將乳化液轉(zhuǎn)移到1毫升注射器中進行免疫接種。

建模:

    麻醉小鼠,選擇距尾基部約1.5cm的注射部位,慢慢地將50μl乳化液皮內(nèi)注射(i.d.)至尾部。二次免疫有時在接種后1421天,以確保高發(fā)病率,所用的C濃度與初次免疫的相同;但是,C不完全弗氏佐劑Incomplete Freund adjuvant, IFA)中乳化用于此免疫。注射部位同樣位于尾部,靠近初次注射部位。

模型評估:

每周對小鼠進行兩到三次關(guān)節(jié)炎發(fā)病率評估。每個爪子應(yīng)在0-4分的范圍內(nèi)進行評估和單獨評分,4表示最嚴重的炎癥。

0分:沒有紅斑和腫脹的跡象。

1分:局限于跗骨或踝關(guān)節(jié)的紅斑和輕度腫脹。

2分:從腳踝到跗骨的紅斑和輕度腫脹。

3分:從腳踝到跖骨關(guān)節(jié)的紅斑和中度腫脹。

掃碼關(guān)注

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